做pcr，如何确定最佳退火及延伸的时间和温度？

2024-11-18 05:33:15

推荐回答（2个）

回答1：

延伸一般都是72° 时间是根据酶的种类和片段长度决定的
退火温度根据引物来决定一般先用55° 不行的话再往下降

回答2：

退火的目的是为了使引物和DNA单链结结合，所以退火温度一定要低于目的DNA和引物的熔点温度。一般情况下引物的熔点温度为40~70度，熔点温度的高低与引物的大小与G+C的比例有关。延伸的温度取决于DNA聚合酶的最适温度，聚合的错配率，引物的熔点温度。最常使用的延伸温度为72度。但是根据你要扩增的产物与引物还是会有差距。