（1）将质粒切割开用限制酶，将目的基因与质粒连接起来用DNA连接酶．
（2）由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中．
（3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入受体细胞．
（4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是抗四环素和同时抗四环素和含氨苄青霉素的大肠杆菌．
（5）D培养基中大肠杆菌对四环素和含氨苄青霉素都抗，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌．
答案：
（1）限制性内切酶、DNA连接酶
（2）氨苄青霉素抗性
（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆菌（受体细胞）
（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2
（5）E
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