如何用标记基因检测目的基因导入载体

2024-11-16 10:39:44
推荐回答(5个)
回答1:

一般标记基因的DNA序列是已知的,若选用抗氨苄青霉素基因,则可在目的基因导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞,若无异常,则抗氨苄青霉素已合成,说明基因已得到表达。

标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达则都会表达。

检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因是否成功的导入受体细胞。或者用分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验,来验证导入基因是否成功表达。

扩展资料

标记基因就是在导入受体细胞时导入进取的人类的已知作用的基因,目的是为检测目的基因是否成功导入。由于一般都是有"鸟枪法"导入的目的基因,所以成功率并不是很高,目的基因的检测和筛选就显得很有必要。例如:

大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体是否吸饱具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。

当含有青霉素的培养基来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。

参考资料来源:百度百科-基因标记

参考资料来源:百度百科-目的基因的检测与鉴定

回答2:

你的题目太笼统,我简言之:

对于细菌而言:
通常标记基因和目的基因都位于一个载体上,标记基因通常为抗生素抗性基因,用含抗生素的平板筛选,长出来的菌落一般都是阳性克隆。也就是:如果检测到了标记基因,就认为目的基因也导入到细菌了。
此外,还可以用蓝白斑筛选(alfa-互补原理),将目的基因插入质粒后,如果有目的基因,则菌落在特定的平板上(通常是假X-GAL 及 IPTG),菌落会呈现白色,而阴性菌落呈蓝色。

对于真核生物,如酵母菌,处用抗生素外,还可以用氨基酸缺陷型平板进行筛选。

对于哺乳动物细胞而言,方法更多:如各种报告基因:荧光蛋白,荧光素酶,抗除草剂基因等等来指示目的基因是否转染到了细胞内。

补充:
当然不会受影响了,存在于同一载体,但是彼此独立。

回答3:

将标记基因和目的基因偶联在一起,如果能在转化后的细胞或细菌中检测到标记基因的表达,就可以认定目的基因已导入到受体宿主中。标记基因如耐药基因、绿色荧光蛋白基因等都可以成为标记基因。

回答4:

看你用哪种标记基因啦
一般将载体(不管目的基因是否成功插入)转入宿主细胞(一般是生长繁殖快速的细菌)。
如果是利用某种抗抗生素(如抗青霉素)基因标记,那么就将宿主细胞培养在含青霉素的培养基中。能存活的都是转入成功的。
如果利用荧光基因标记,那么哪些发出荧光那些就是。
如果是利用LacZ,那就是利用蓝白斑筛选试验,白色的就是转入成功的。
也可以通过利用与目的基因碱基互补配对的探针杂交,选择。

回答5:

用基因探针杂交