在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切体系中,反应体系是什么?或者这两种酶在体系中的比例是多少?请指教!

请有经验的前辈多多指教!!!
2024-11-02 23:30:52
推荐回答(2个)
回答1:

反应体系应该指的是,两种酶同时使用时,应该用的buffer系统,且每一种酶的用量,DNA的用量,以及保证酶量不超过总反应体积的1/10,即20ul体系中,两个酶的总量不能超过2ul。

你可以在内切酶公司网站上查到推荐的反应体系:

从图上看,这两个酶在不能再另一个酶的推荐buffer中使用,只能用2X Tango buffer进行双酶切,而从酶活性上来看,XbaI在2X Tango中,活性50-100%,而XhoI则是100%,所以如果两个酶要调整用量的话,XbaI需要是XhoI用量的2倍,但就是酶总量不能超过总体积的10%。

回答2:

  如果要精确计算的话,需要根据DNA的量和酶的量进行计算。限制酶的活性在管子上都有说明。
  如果不精确的话,10微升体系中加入0.5-1微升酶都可以。