类风湿因子的测定

类风湿因子（RF）是在类风湿性关节炎（RA）病人血清中发现，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，它是一种抗变性IgG的抗体，属IgM型。可与IgGFc段结合。RA病人和约50%的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG（或与抗原结合的IgG）或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。健康人产生RF的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制RF的产生，故一般不易测出。RF主要为IgM类自身抗体，但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类。各类RF临床意义有所不同。测定IgG、IgA、IgM类RF通常用ELISA间接法，即用热凝集兔IgG包被反应板微孔，加入检样后，再分别加抗人IgG、IgA、IgM酶标记抗体，使反应后再与底物呈色。为防止各Ig类别RF相互干扰，酶标记抗体使用标记的抗体F（ab）2片段。 将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即发生肉眼可见的凝集，此称胶乳凝集试验。
在用热凝集变性IgG包被聚苯乙烯反应板的微孔中，加入待测血清，如有RF存在，则相互结合，随后再加入酶标记热凝集变性的IgG与之反应，在加入底物后即可显色。根据显色程度可判断有无RF存在及其水平，此为双抗原夹心ELISA法。 1、56℃30分钟灭活，（灭活C1q以阻止假阳性凝集）。将待测血清用0.1mol/L PH8.2甘氨酸缓冲盐水作1：20稀释（生理盐水1ml中加血清0.05ml）。
2、取此稀释血清1滴（约0.05ml），加于黑色方格玻片的方格内，加乳胶RF试剂1滴，立即摇动反应板3分钟，使其充分混匀后，于直射光下观察。每次试验均设阳性与阴性对照。 胶乳凝集试验正常人多为阴性反应，如3分钟内出现显凝集者为阳性。阳性反应的标本应将血清进行倍比稀释测定滴度。ELISA法可根据显色程度，与阳性和阴性对照参比，作出阳性或阴性的判断。